Prospecção de atividade antifúngica em extratos de Acanthamoeba castellanii

Abstract

Introdução: Micoses sistêmicas são motivo de preocupação em decorrência do aumento de sua frequência, no Brasil e em todo o mundo, frente às escassas e limitadas opções terapêuticas, muitas vezes tóxicas, de alto custo e já ineficazes devido à resistência adquirida pelos patógenos. Nesse sentido, há uma necessidade emergente de novas moléculas com potencial antifúngico capazes de substituir e/ou complementar as terapêuticas já existentes. Com base em estudos prévios do nosso grupo, observamos que amebas de solo podem utilizar outros mecanismos, em adição à fagocitose, para matar fungos. Dessa maneira, decidimos investigar se extratos da ameba de solo Acanthamoeba castellanii poderiam fornecer moléculas com potencial atividade antifúngica. Objetivo: Testar a atividade antifúngica do sobrenadante e do lisado bruto dessa ameba (suspensão celular lisada), bem como das frações polares e apolares, de culturas de A. castellanii contra fungos patogênicos, dentre os quais Cryptococcus neoformans (linhagem H99), Cryptococcus gattii (linhagem R265), Paracoccidioides brasiliensis (linhagem Pb18) e Paracoccidioides lutzii (linhagem Pb01). Métodos: Crescimento de células de A. castellanii em garrafas de cultivo em meio PYG. Coleta do sobrenadante, lavagem e coleta das células que foram submetidas à lise por sonicação. Extração de lipídios pelo método de Bligh and Dye para separação de extratos polares e apolares. Cultivo dos diferentes fungos segundo protocolos já bem estabelecidos. Testes de avaliação de atividade antifúngica, seguindo protocolos de microdiluição em caldo propostos pelo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), M27-A3, com algumas modificações. Experimentos realizados em placas de 96 poços, visando à determinação de atividade inibitória dos extratos. Resultados: Resultados evidenciaram o efeito inibitório da suspensão celular lisada contra Paracoccidioides spp., numa diluição de 1:8 do extrato bruto, mas não foi observado efeito inibitório contra Cryptococcus spp. Nos testes com as frações, usamos apenas C. neoformans, mas tivemos problemas para ressuspender os extratos apolares em concentrações não inibitórias de dimetilsufóxido (DMSO). Infelizmente não conseguimos resultados conclusivos dos ensaios com P. brasiliensis, uma vez que tivemos problemas no cultivo dos fungos. Conclusão: A princípio os sobrenadantes das amebas, nem os extratos brutos induziram inibição no crescimento de C. neoformans ou C. gattii. Observamos uma inibição do crescimento de P. brasiliensis e P. lutzii na presença do extrato bruto, mas outros testes precisam ser concluídos para confirmarmos se essa atividade estaria em frações polares ou apolares do extrato.