Avaliação do potencial biotecnológico de três genes que codificam a enzima Estilbene sintase isolados de Arachis spp

Abstract

A expressão transiente é a expressão temporária de um transgene, sendo uma forma de transformação genética rápida e de baixo custo. Dessa forma, a agroinfiltração é uma das abordagens mais usadas para a detecção da expressão transiente em plantas e consiste na infiltração de tecidos foliares com Agrobacterium spp.. O gene STS codifica a enzima Estilbeno Sintase responsável pela síntese do resveratrol que é um poderoso antioxidante encontrado em um número limitado de plantas, incluindo espécies silvestres do gênero Arachis, as quais são nativas brasileiras. Esse gene é relacionado com a reação da planta a diferentes estresses ambientais bióticos, como a alguns dos principais fungos causadores de doenças, como os do gênero Sclerotinia. Utilizando a metodologia da agroinfiltração o objetivo do trabalho é determinar a eficiência da metodologia em permitir a avaliação da expressão de um transgene de interesse em folhas de Nicotiana benthamiana agroinfiltradas com três construções contendo distintos genes STS oriundos de três espécies de Arachis e compará-las com as construções controle (vetor empty, mock com solução de cloreto de magnésio e amostra de amendoim induzidos por luz UV). Para isso, sementes de N. benthamiana foram germinadas em substrato e crescidas em sala de cultura sob condições controladas. Duas semanas após a semeadura, as plântulas foram transplantadas para recipientes plásticos contendo solo estéril e transferidas para casa de vegetação. Agrobacterium tumefaciens ‘GV30101’ transformada com cada um dos genes Assts2, Aists3 e Acsts4 ou gfp (Green Fluorescent Protein), foram cultivadas em meio LB líquido e posteriormente infiltradas em folhas de N. benthamiana por meio da câmara de vácuo do acelerador de micropartículas, utilizado para que a infiltração ocorresse em todas as folhas de forma uniforme. Posteriormente, as folhas foram avaliadas em microscópio com filtro UV quanto à expressão de gfp. Dessa forma, a expressão transiente do gene gfp, 3 dias após a agroinfiltração, se mostrou eficiente como indicador da expressão temporária dos três genes STS que estavam no mesmo vetor pPZP além de representar de forma concreta um meio de valorização da biodiversidade brasileira.