Efeito de agonistas de PPARγ na fosforilação das vias de sinalização NFκB e SAPK/JNK em cultura de macrófagos

Abstract

Como tratamento para a DM2, têm se utilizado as TZDs, fármacos que atuam como agonistas totais de PPARγ. Além do mecanismo clássico de ação das TZDs, estudos demonstraram que os agonistas de PPARγ podem mediar efeitos rápidos em diversos tipos celulares e que envolve uma série de eventos intracelulares. No entanto, ainda não foi explorado se estes mecanismos não-genômicos poderiam explicar os efeitos benéficos do agonista parcial, GQ-16. Estudos prévios indicaram que esse ligante apresenta efeitos sensibilizador insulínico comparáveis aos do agonista total rosiglitazona (RSG), porém sem indução de ganho de peso. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi estudar o efeito da rosiglitazona e do GQ-16 na fosforilação das vias de sinalização do NFκB e da SAPK/JNK em cultura de macrófagos na presença ou ausência de estímulo inflamatório. Para isso, linhagem de macrófagos murinos RAW 264.7 foram tratadas com veículo (DMSO 0,001%), LPS (100 ng/mL), RSG (10-5M), GQ-16 (10-5M), RSG+LPS e GQ-16+LPS. O pré-tratamento das células com agonistas de PPARγ foi de 30 minutos para depois adicionar o LPS por 15 ou 60 minutos. Posteriormente as células foram colhidas e realizado ensaio de Western Blot. O imunoensaio foi realizado com os anticorpos anti-fosfo NFκB e anti-total NFκB ou anti-fosfo SAPK/JNK e anti-total SAPK/JNK. As membranas foram reveladas por quimioluminescência e realizada a densitometria das bandas e a análise estatística dos dados. Os resultados obtidos demonstraram que o pré-tratamento com os agonistas apenas inibiu a fosforilação do NFκB induzida pelo LPS em 15 minutos de tratamento. Foi observada apenas uma tendência do mesmo pela rosiglitazona na fosforilação da SAPK/JNK. Já no tratamento por 60 minutos com LPS, nem RSG e nem GQ-16 demonstraram inibição da fosforilação em nenhuma das vias estudadas. Portanto, conclui-se que possa existir uma relação entre os efeitos não-genômicos dos agonistas de PPARγ e os efeitos anti-inflamatórios do receptor, porém mais experimentos devem ser realizados para confirmar tal afirmação.