Atividade proteolítica salivar de triatomíneos vetores da Doença de Chagas

Abstract

Os triatomíneos hematófagos, vetores da Doença de Chagas, são insetos cujo crescimento, mudas e reprodução são regulados pelo repasto sanguíneo. Alguns RNAs mensageiros de proteases foram descritos em sialotranscriptomas de triatomíneos hematófagos, sugerindo que essas proteínas sejam expressas na saliva desses animais. O objetivo desse estudo foi identificar e caracterizar atividades proteolíticas na saliva de Rhodnius prolixus e R. neglectus em diferentes dias pós-repasto sanguíneo (dprs). Os triatomíneos foram mantidos em colônia no Biotério do IB, UnB. Cinco, 12 e 20 dprs, as glândulas salivares foram dissecadas para a obtenção da saliva. O perfil proteico foi analisado por eletroforese em SDS-PAGE; a atividade gelatinolítica por zimografia em gel; e a atividade proteolítica sobre o substrato fluorogênico Z-Phe-Arg-AMC em solução, na ausência ou presença de inibidores de proteases. O perfil proteico das salivas nos diferentes períodos após o repasto sanguíneo é semelhante. As proteínas salivares que apresentaram atividade proteolítica no ensaio zimográfico possuem massas moleculares entre 20 e 70 kDa. As salivas apresentaram atividade enzimática sobre o peptídeo fluorogênico Z-Phe-Arg-AMC, inibidas apenas nas amostras de 20 dias após o repasto sanguíneo por fenantrolina (R. prolixus, 48,86%; e R. neglectus, 38,43% de inibição). Esses resultados sugerem a presença, principalmente, de metaloproteases na saliva de R. prolixus e R. neglectus. No entanto, uma investigação mais profunda é necessária e poderá ajudar a elucidar o papel dessas proteases salivares no processamento de peptídeos bioativos presentes na saliva e/ou no hospedeiro vertebrado e suas implicações para o repasto sanguíneo e a transmissão do T. cruzi.