Avaliação in vitro do efeito da irradiação de laser de baixa potência no fungo patogênico humano Cryptococcus neoformans

Abstract

O Laser de Baixa Potencia possui varias aplicações e na fisioterapia seus efeitos analgésico, anti-inflamatório e cicatrizante são os mais explorados. Apesar desses efeitos serem desejados no tratamento das lesões cutâneas infectadas, o uso do laser não e recomendado por considerar que ele estimule a proliferação celular de microrganismos. Ainda não existem evidencias quanto a isso. O objetivo geral deste trabalho foi avaliar in vitro o efeito do laser de baixa potencia na viabilidade e na expressão dos fatores de virulência do fungo patogênico C. neoformans, o agente etiológico da criptococose. Esta doença pode apresentar-se como infecção cutânea e geralmente tratada com antifúngicos, um tratamento longo e com efeitos colaterais diversos. O laser representa uma possível nova forma de tratamento para estas lesões, de forma não prejudicial e eficiente. A pesquisa foi realizada em três etapas: avaliação da viabilidade de C. neoformans após a irradiação do laser, a avaliação fenotípica e da virulência, e avaliação da expressão dos genes envolvidos em sinalização e proliferação celular e estresse oxidativo. Na primeira etapa, encontrou-se uma redução significativa da viabilidade em ambos comprimentos de onda, sendo que no de 904nm essa redução apareceu em quase todas as dosimetrias empregadas e no de 660nm, apenas quando irradiado 200J. Não houve alteração dos fatores de virulência e, na terceira etapa, apenas o gene que codifica a subunidade catalitica da calcineurina foi influenciado pela irradiação (200J, 904nm), nos demais não houve alterações transcricionais significativas em nenhuma das condições testadas. ________________________________________________________________________ ABSTRACT

There are many applications of the Low Power Laser, in physiotherapy, the analgesic, anti-inflammatory and cicatrizing effects are the most exploited. These effects are desirable for skin treatment on infected wounds/lesions, but lasers are not recommended due to the fact that it may stimulate the proliferation of microorganisms, although there is no evidence about that until now. The purpose of this study was to evaluate the effect of low power laser in vitro, the viability and the expression of virulence factors in the pathogenic fungus C. neoformans, etiological agent of cryptococcosis. This disease can present as skin infection, usually treated with antifungal medication, eventhough it is a slow cure with several side effects. The use of laser could be a new treatment, with less side effects and more efficient cure, for these injuries. The research was conducted in three stages: evaluating the viability of C. neoformans after laser irradiation, virulence and phenotype analysis, and evaluat on of genes related to signaling, cell proliferation and oxidative stress. In the first stage, we found a significant reduction of viability at both wavelengths, 904nm and 660nm. The reduction at 904nm appeared with almost all of the dosimetry applied, and at 660nm, reduction was only observed when irradiated with 200J. There were no changes in virulence factors, and in the third stage, only the gene encoding catalytic subunit of calcineurin was influenced by irradiation (200 J, 904 nm), in the others there were no significant transcriptional changes under any of the conditions tested.