Validação de método cromatográfico para quantificação de bergenina e ácido alfa-lipoico na pele

Abstract

O ácido alfa-lipoico (ALA) é uma molécula amplamente estudada por suas propriedades antioxidantes e aplicações cosméticas consolidadas. A bergenina (BER), por sua vez, embora menos explorada nesse contexto, apresenta características promissoras para utilização em formulações tópicas, principalmente devido às suas propriedades anti inflamatórias e antioxidantes. Diante disso, a validação de um método analítico, capaz de quantificar ambas as substâncias extraídas da pele, constitui uma contribuição relevante para pesquisas voltadas ao desenvolvimento de novos produtos cosméticos. Neste estudo, foi validado um método baseado em cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) para a quantificação simultânea de ALA e BER extraídos da pele. A metodologia empregou uma coluna cromatográfica de fase reversa C18 (250 mm × 6 mm; 5 µm), utilizando-se eluição em gradiente com fase móvel composta por acetonitrila e solução aquosa de ácido fosfórico (pH = 3). A vazão da fase móvel foi fixada em 1 mL/min, a temperatura do forno mantida em 40 °C, o volume de injeção das amostras foi de 50 µL e a detecção foi realizada a 210 nm. O tempo total de corrida foi de 20 minutos, com tempos de retenção de 6,2 minutos para a BER e 14,3 minutos para o ALA. A validação do método seguiu os parâmetros estabelecidos pelas diretrizes internacionais, incluindo avaliação de linearidade, seletividade, limites de detecção (LOD) e quantificação (LOQ), precisão, exatidão e robustez. A seletividade foi confirmada por meio da quantificação das substâncias na presença de contaminantes de pele suína. A linearidade foi observada na faixa de 0,5 a 15 µg/mL, com coeficientes de correlação (r) superiores a 0,999 para ambas as moléculas. Os valores de LOD e LOQ para a bergenina foram de 0,090 µg/mL e 0,273 µg/mL, respectivamente, enquanto para o ALA foram de 0,143 µg/mL e 0,435 µg/mL, respectivamente. Os valores de desvio padrão relativo (DPR%) para verificação da precisão foram inferiores a 3,9%, e os testes de exatidão mostraram valores de erro relativo compreendidos entre 95% e 115%, demonstrando a confiabilidade do método desenvolvido. Além disso, o método mostrou-se robusto frente a pequenas variações nas condições cromatográficas. Concluiu-se que o método desenvolvido é adequado para a quantificação simultânea de ALA e BER na pele para o desenvolvimento de formulações cosméticas.