Implementação e validação do método para a determinação da atividade da enzima arilsulfatassae em solos

Abstract

A atividade de enzimas no solo é amplamente reconhecida como um importante parâmetro indicativo da sua qualidade e saúde, sendo sensível a alterações no uso e manejo do solo. Nesse contexto, a arilsulfatase se destaca como uma das principais enzimas estudadas, por participar do ciclo do enxofre e por liberar esse nutriente na forma assimilável de sulfato (SO₄²⁻), essencial para o desenvolvimento vegetal. Essa enzima é um dos pilares da tecnologia de Bioanálise de Solo, desenvolvida pela Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA), na qual a determinação de sua atividade é feita por meio de análise espectrofotométrica do p-nitrofenol (pNP), liberado quando a enzima reage com o substrato p-nitrofenil sulfato (PNS), sob condições adequadas. Considerando a complexidade das amostras de solo e a sensibilidade dos ensaios enzimáticos, é importante que os procedimentos utilizados sejam descritos, testados e validados. Este trabalho, portanto, tem como objetivo contribuir para esse cenário, buscando padronizar o método analítico para quantificação da atividade de arilsulfatase no solo. Para isso, foi construída uma curva analítica em triplicata, variando de 0,5 µg a 125 µg de pNP, utilizando soluções de pNP (25,0 µg/mL), CaCl₂ 0,5 M e NaOH 0,5 M. Com base nessa curva, foram avaliados parâmetros estatísticos para verificar a linearidade, a faixa linear dinâmica, o limite de detecção (LD), o limite de quantificação (LQ) e se o comportamento é homocedástico. Esses parâmetros foram calculados a partir das absorbâncias nos comprimentos de onda de 400 nm e 420 nm. A verificação da precisão foi realizada em concentrações próximas ao LQ, utilizando amostras reais de solo preparadas com tampão acetato (pH 5,8), substrato da enzima (PNS 0,05 M), CaCl₂ 0,5 M e NaOH 0,5 M. Os resultados indicaram que a curva analítica atende aos critérios estabelecidos pela Resolução da Diretoria Colegiada (RDC) 166/2017 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), sendo considerada válida. Espera-se, em trabalhos futuros, refinar os dados da curva para delimitar com maior precisão a faixa de trabalho e iniciar análises de amostras reais de solo provenientes de projetos desenvolvidos por colaboradores.