Implementação e validação do método para a determinação da atividade da enzima β-glicosidase em solos

Abstract

A enzima β-glicosidase é responsável pela última etapa da degradação da celulose, catalisando a reação que libera glicose no solo. Assim, está diretamente relacionada com a ciclagem do carbono e degradação de matéria orgânica, o que a torna um bioindicador sensível para a avaliação de qualidade e saúde do solo. A determinação da atividade enzimática da β-glicosidase tornou-se amplamente usada no âmbito agronômico, seguindo a metodologia estabelecida por Tabatabai em 1994. O método quantifica indiretamente a atividade da enzima, através da determinação de espectro colorimétrica do p-nitrofenol (pNP) liberado pela quebra da ligação glicosídica presente no substrato p-nitrofenil-β-D-glicopiranosídeo (PNG), catalisada pela β-glicosidase. Dessa maneira, o presente estudo tem como objetivo aprofundar a compreensão sobre a enzima β-glicosidase em um ponto de vista químico, como também, realizar a validação preliminar do seu método de análise, determinando seus limites analíticos. Para isso, fez-se um levantamento bibliográfico sobre a metodologia, traçou-se uma linha temporal desde seu surgimento à sua aplicação atual pela Embrapa. Além disso, foi realizada a validação do método seguindo a Resolução nº166/2017 da Anvisa. Determinou-se a linearidade, o limite de detecção (LD), o limite de quantificação (LQ) e a homocedasticidade da curva analítica do pNP. A validação mostrou que o método apresenta uma alta linearidade (R2 = 0,999) em uma ampla faixa de massas de pNP (0,5 a 125 µg), sendo homocedástica. A faixa de linearidade dinâmica e o coeficiente de variação (CV) indicaram que os dois pontos de menores massas apresentavam-se com baixa reprodutividade, portanto fora dos limites de quantificação. Portanto, os limites calculados seguindo a resolução da Anvisa apresentaram valores de LD = 3,83 µg e LQ = 11,62 µg, para o comprimento de onda de 400 nm e LD = 4,40 µg e LQ 13,35 µg para 415 nm. Realizou-se, assim, uma validação preliminar da curva analítica, com a finalidade de viabilizar estudos posteriores.