Estabelecimento de cultura de células-tronco da polpa dentária de humanos para modelo de neurotoxicidade induzida por quimioterápicos

Abstract

Introdução: As células-tronco da polpa dentária (do inglês, dental pulp stem cells - DPSCs) podem ser uma fonte acessível, pouco invasiva e promissora para estudos de neurotoxicidade e neuroproteção, especialmente em neuropatia periférica induzida por quimioterápicos (NPIQ). Representam uma alternativa viável às culturas primárias in vitro de roedores e linhagens imortalizadas, por se tratar de células primárias humanas com potencial de diferenciação neuronal. Este trabalho teve como objetivo estabelecer o cultivo de DPSCs no Laboratório de Ensaios Farmacológicos para aplicação em estudos de NPIQ e desenvolvimento de fármacos neuroprotetores. Metodologia: DPSCs foram obtidas de terceiros molares extraídos por motivo clínico. A polpa foi removida, processada enzimaticamente com colagenase e mecanicamente com pipetas pasteur condicionadas. As células foram cultivadas em DMEM suplementado com 20% de soro fetal bovino, em atmosfera de 5% de CO₂ a 37°C, sendo o cultivo estabelecido após adesão e expansão celular. A diferenciação foi realizada seguindo dois protocolos diferentes. O primeiro, realizou a diferenciação através da pré indução utilizando 1mM de β-mercaptoetanol (BME), por 24h e, após esse periódo, o BME foi retirado e foi adicionado fator de crescimento do nervo (NGF) na concentração de 100ng/mL por 3 dias. O segundo protocolo foi realizado utilizando meio DMEM sem soro, para induzir as células à diferenciação por 4 dias. Resultados: Para o estabelecimento da cultura o protocolo enzimático foi realizado com colagenase tipo 1 e processamento mecânico para realizar o plaqueamento e posterior expansão por ciclos de tripsinização e subcultivo. As DPSCs apresentaram morfologia circular inicial e posterior aspecto de fibroblasto, atingindo 80% de confluência em cerca de 14 dias em placas de 12 poços. A diferenciação foi realizada utilizando 2 protocolos distintos, em que foi possível observar a morfologia das células neurônio-like, e validar parcialmente o uso dessas células diferenciadas. Conclusão: Foi possível estabelecer e padronizar o cultivo de DPSCs humanas em nosso laboratório e diferenciá-las em células neurônio-like, consolidando-as como modelo experimental para pesquisas em neurotoxicidade e neuroproteção.