Implementação de metodologia de quantificação de cortisol por HPLC-UV

Abstract

Introdução: A Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (HPLC) oferece alta eficiência na separação de compostos, possibilitando a análise de uma ampla gama de moléculas com diversas características físico-químicas. O cortisol é um hormônio esteróide produzido pelas glândulas supra-renais, localizadas no topo de cada rim. Pertencente à classe dos glicocorticóides, o cortisol desempenha um papel crucial no metabolismo, na resposta ao estresse e na regulação do sistema imunológico. Objetivos: A pesquisa visa implementar uma metodologia para identificação de cortisol utilizando amostra padrão de cortisol para quantificação, acoplada à cromatografia líquida HPLC-UV, auxiliando na qualificação e monitoramento de doenças relacionadas a esse hormônio. Materiais e Métodos: Os materiais incluem Cortisol e Metanol. A metodologia adota técnicas adaptadas para quantificação do cortisol com base em estudos anteriores. A validação do método analítico é realizada por CLAE com coluna específica e fase móvel água/metanol. A preparação da amostra segue uma curva de complexidade com diluições seriadas da amostra padrão de cortisol. Os estudos qualitativos abrangem análises de linearidade e comparabilidade, essenciais para garantir a confiabilidade dos resultados. O cálculo do pico cromatográfico é destacado como uma etapa crucial, com implicações significativas na interpretação e validação dos resultados, realizada pelo software LC Solution. Esta abordagem metodológica abrangente e ética contribui para a obtenção de dados confiáveis e reprodutíveis em análises químicas e bioquímicas, essenciais para a pesquisa científica. Resultados e Discussões: O estudo concentra-se na otimização das condições do sistema de detecção para análise de compostos, especificamente cortisol, utilizando UV-vis e HPLC. Os comprimentos de onda que cobrem maior intensidade de sinal foram encontrados em 245 nm. Um padrão crescente no valor de absorção é observado nas análises de amostras, especialmente com concentrações mais elevadas de cortisol. O espectro apresenta dois picos, o primeiro possivelmente associado ao ACTH e o segundo ao cortisol puro, com a análise focada na identificação da presença da molécula nas amostras.A metodologia aprovada passou por estudos de validação analítica, incluindo avaliação de linearidade de réplicas e comparabilidade de métodos, utilizando UV-vis como métrica de confirmação. Conclusão: Destaca-se a importância da cromatografia como ferramenta essencial na análise de diversos compostos, permitindo a determinação de múltiplos analitos em uma única amostra. A versatilidade da cromatografia abrange diversos campos do conhecimento, e sua aplicabilidade continua a se expandir rapidamente. O foco permanece na avaliação das condições cromatográficas para melhorar a separação dos compostos, facilitando a análise através de um detector seguro.