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dc.contributor.advisorMuniz, Gabriel Silva Vignoli-
dc.contributor.authorCavalcante, Gabriela Khouri-
dc.identifier.citationCAVALCANTE, Gabriela Khouri. Estudos da interação do peptídeo intragênico Hs02 com DNA por calorimetria diferencial de varredura, espectroscopia de fluorescência estacionária e resolvida no tempo. 2024. 63 f., il. Trabalho de Conclusão de Curso (Bacharelado em Química Tecnológica) — Universidade de Brasília, Brasília, 2024.pt_BR
dc.descriptionTrabalho de Conclusão de Curso (graduação) — Universidade de Brasília, Instituto de Química, 2024.pt_BR
dc.description.abstractPeptídeos intragênicos (IAPs) são formados por fragmentos de proteínas; muitos deles exibem propriedades anti-inflamatórias e antibióticas. Em particular, o IAP Hs02 (KWAVRIIRKFIKGFIS-NH2), derivado do fragmento da proteína humana miosina 1h (NP_001094891.3), demonstrou uma potente ação antimicrobiana in vitro. O presente trabalho investiga a interação entre o Hs02 e o DNA em nível molecular, utilizando técnicas experimentais como Calorimetria Diferencial de Varredura (DSC), Espectroscopia de Fluorescência do Estado Estacionário (FE) e Fluorescência Resolvida no Tempo (FRT), monitorando tanto o DNA quanto o peptídeo. Traços de DSC mostram que a solução de DNA (250 μmol L⁻¹) apresenta um pico calorimétrico endotérmico ao redor de 80 ºC, correspondendo à desnaturação do DNA. Concentrações crescentes de Hs02 deslocam paulatinamente o pico de transição térmica para temperaturas maiores, efeito possivelmente relacionado à blindagem das cargas negativas dos fosfatos do esqueleto do DNA. Concentrações de Hs02 acima de 20 μmol L⁻¹ reduzem a entalpia de transição de fase do DNA, e a 50 μmol L⁻¹ de Hs02, não se observa mais esse evento. O resíduo de triptofano na segunda posição da cadeia peptídica foi utilizado como sonda intrínseca de fluorescência e, na presença de concentrações saturantes de DNA, observa-se um pequeno deslocamento relativo para o azul de 6 nm. Este resultado sugere que o resíduo de triptofano continua exposto às moléculas de solvente, possivelmente com a porção N-terminal associada aos grupamentos fosfatos do DNA. Assim, a FE e o DSC sugerem uma forte interação entre os fosfatos do esqueleto do DNA e o hexacatiônico peptídeo Hs02. Outrossim, monitorar a fluorescência intrínseca do peptídeo e o seu decaimento de fluorescência na ausência e na presença de diferentes concentrações de DNA possibilitou a determinação de constantes de associação para o sistema Hs02-DNA da ordem de 10⁴ L mol⁻¹. Os resultados alcançados neste estudo podem oferecer contribuições significativas para o entendimento do mecanismo de ação do peptídeo Hs02 em células, bem como para o desenvolvimento de um possível sistema de entrega de material genético destinado à terapia gênica.pt_BR
dc.rightsAcesso Abertopt_BR
dc.subject.keywordPeptídeospt_BR
dc.subject.keywordDNApt_BR
dc.subject.keywordEspectroscopiapt_BR
dc.titleEstudos da interação do peptídeo intragênico Hs02 com DNA por calorimetria diferencial de varredura, espectroscopia de fluorescência estacionária e resolvida no tempopt_BR
dc.typeTrabalho de Conclusão de Curso - Graduação - Bachareladopt_BR
dc.date.accessioned2024-09-24T18:53:45Z-
dc.date.available2024-09-24T18:53:45Z-
dc.date.submitted2024-07-10-
dc.identifier.urihttps://bdm.unb.br/handle/10483/39972-
dc.language.isoPortuguêspt_BR
dc.rights.licenseA concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor que autoriza a Biblioteca Digital da Produção Intelectual Discente da Universidade de Brasília (BDM) a disponibilizar o trabalho de conclusão de curso por meio do sítio bdm.unb.br, com as seguintes condições: disponível sob Licença Creative Commons 4.0 International, que permite copiar, distribuir e transmitir o trabalho, desde que seja citado o autor e licenciante. Não permite o uso para fins comerciais nem a adaptação desta.pt_BR
dc.contributor.advisorcoDuarte, Evandro Luizpt_BR
dc.description.abstract1Intragenic peptides (IAPs) are formed by fragments of proteins; many of them exhibit antiinflammatory and antibiotic properties. In particular, the IAP Hs02 (KWAVRIIRKFIKGFISNH2), derived from the fragment of the human protein myosin 1h (NP_001094891.3), demonstrated a potent antimicrobial action in vitro. This study investigates the interaction between Hs02 and DNA at the molecular level, using experimental techniques such as Differential Scanning Calorimetry (DSC), Steady-State Fluorescence Spectroscopy (FE), and Time-Resolved Fluorescence (TRF), monitoring both the DNA and the peptide. DSC traces show that the DNA solution (250 μmol L⁻¹) exhibits a calorimetric peak around 80 ºC, corresponding to DNA denaturation. Increasing concentrations of Hs02 gradually shift the thermal transition peak to higher temperatures, an effect possibly related to the shielding of the negative charges of the DNA backbone phosphates. Concentrations of Hs02 above 20 μmol L⁻¹ reduce the phase transition enthalpy of DNA, and at 50 μmol L⁻¹ Hs02, the calorimetric peak is no longer observed. The tryptophan residue in the second position of the peptide chain was used as an intrinsic fluorescence probe, and in the presence of saturating concentrations of DNA, a slight blue shift of 6 nm is observed. This result strongly suggests that the tryptophan residue remains exposed to solvent molecules, possibly with the N-terminal portion strongly associated with the DNA phosphate groups. Thus, FE and DSC strongly suggest a strong interaction between the DNA backbone phosphates and the hexacationic peptide Hs02. Additionally, monitoring the intrinsic fluorescence of the peptide and its fluorescence decay in the absence and presence of different concentrations of DNA enabled the determination of association constants for the Hs02-DNA system on the order of 10⁴ L mol⁻¹. The results obtained in this study may offer significant contributions to understanding the mechanism of action of the Hs02 peptide in cells, as well as to the development of a possible gene delivery system for gene therapy.pt_BR
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