Modulação do processo de reparo em modelo in vitro de osteorradionecrose : um estudo piloto

Abstract

A osteorradionecrose (ORN) pode ser descrita como um osso exposto e necrótico em um local irradiado que não cicatriza em um período de três a seis meses. Atualmente, a escolha do tratamento para ORN depende da gravidade do tecido necrótico e muitas intervenções são consideradas para melhor sucesso clínico. No entanto, ainda não há na literatura o estabelecimento de tratamento ideal ou diretrizes consensuais sobre a melhor terapia para ORN. A curcumina, o bpV(pic) e a terapia de fotobiomodulação são possíveis agentes promissores na prevenção e tratamento da ORN, porém ainda não foram testados para este fim. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi estabelecer um modelo in vitro de osteorradionecrose usando células humanas imortalizadas de osteoblastos-like (SaOS-2) e modular o processo de reparo deste modelo usando curcumina, bpV(pic) e terapia de fotobiomodulação. Este trabalho foi realizado em duas partes. Primeiramente, foi definido o modelo in vitro de osteorradionecrose pela aplicação de estímulo bacteriano com lipossacarídeos (LPS) de Escherichia coli e extrato protéico de Porphyromonas gingivalis (Pg) e ainda com radiação ionizante. Após os estímulos, foi analisada a viabilidade celular pelo ensaio de MTT, a mensuração óxido nítrico e a expressão gênica de PIK3CA, mTOR, AKT e PTEN por meio da reação em cadeia de polimerase em tempo real/quantitativo (RT qPCR). Em um segundo momento, o modelo foi tratado para avaliar a modulação do reparo com curcumina, bpV(pic) e terapia de fotobiomodulação. Os efeitos dos tratamentos foram avaliados pelo ensaio de MTT e pela mensuração da produção de óxido nítrico. A análise estatística foi realizada com GraphPad Prism. As diferenças foram consideradas estatisticamente significativas quando p<0,05. O modelo in vitro de osteorradionecrose foi estabelecido como cultura de células SaOS-2 submetidas a 16Gy de radiação ionizante sem estímulo bacteriano. Essa dose foi capaz de reduzir a viabilidade celular e aumentar a produção de óxido nítrico. O uso de curcumina, bpV(pic) e terapia de fotobiomodulação não aumentaram a viabilidade celular nas doses utilizadas neste estudo e a mensuração de óxido nítrico não foi possível pelas baixas taxas de produção. Conclui-se que a dose de radiação ionizante de 16Gy sem estímulo bacteriano foi capaz de reduzir a viabilidade celular e aumentar a produção de óxido nítrico. Assim, esta dose pode ser utilizada para estudos in vitro com células SaOS-2 para investigar a modulação do processo de reparo ósseo na osteorradionecrose. As doses utilizadas de curcumina, bpV(pic) e terapia de fotobiomodulação não foram capazes de aumentar a viabilidade celular. Portanto, novas doses e mais ensaios devem ser investigados para verificar melhores tratamentos para a osteorradionecrose.