Estudos visando a identificação da enzima responsável pela hidrólise do peptídeo CHIM3 no sítio AXA em Escherichia coli e Staphylococcus aureus

Abstract

O presente trabalho objetifica a identificação da enzima responsável pela hidrólise do polipeptídeo de CHIM3 no sítio de clivagem AXA em Escherichia coli e Staphylococcus aureus. Para tanto, a estrutura primária de CHIM3 foi alterada, de modo a descaracterizar o sítio de hidrólise pela enzima SPase I, dando origem ao peptídeo CHIM3-P, no qual o motivo A-X-A foi substituído por P-X-P. CHIM3-P foi sintetizado via síntese de peptídeos em fase sólida (SPPS), purificado por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) e foi sequenciado por Espectrometria de Massas (MS e MS/MS). No entanto, devido à indisponibilidade do cromatógrafo líquido acoplado a espectrômetro de massas do Instituto de Química da Universidade de Brasília, cujo sistema de resfriamento encontrava-se fora de serviço, não foi possível conduzir os ensaios de perfil de digestão de E. coli e S. aureus dos peptídeos CHIM3 e seu análogo modificado CHIM3-P em tempo hábil para entrega deste trabalho. O equipamento já encontra-se disponível e, como perspectiva, pretende-se prosseguir a incubação da molécula em culturas de E. coli e S. aureus para investigar seu perfil de digestão via cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas.