Avaliação da senescência e do efeito do congelamento em culturas primárias de células pulpares de paciente com Síndrome de Raine

Abstract

A síndrome de Raine (SR), pertencente às displasias osteoescleróticas, é uma doença rara, caracterizada pela presença de anomalias craniofaciais, calcificações ectópicas e alterações dentárias, tais como amelogênese imperfeita e defeitos dentinários. A SR é causada por mutações autossômicas recessivas no gene FAM20C, que codifica uma quinase responsável, entre outras funções, por fosforilar proteínas envolvidas com o processo de biomineralização. Nesse sentido, o estabelecimento de modelos experimentais faz-se importante para melhor compreensão das manifestações oro-dentais observadas nesses pacientes, além de possibilitar o surgimento de novas evidências que auxiliem em seu diagnóstico e tratamento. Em um estudo anterior realizado in vitro comcélulas pulpares humanas (CPHs) de um paciente com SR que apresentava alterações dentinárias graves, foi observado que as células aprentavam morfologia alterada e capacidade proliferativa reduzida, sugerindo um fenótipo senescente. Contudo, por terem passado pelo processo de congelamento, a hipótese de que a senescência teria ocorrido pela criopresevação foi levantada. Diante disso, os objetivos do presente estudo foram: 1) avaliar se a criopreservação a -80°C altera o padrão de proliferação e senescência de CPHs de indivíduos saudáveis, 2) comparar o padrão de proliferação e senescência de CPHs de paciente com SR e indivíduos saudáveis. Para isso, foram estabelecidas culturas primárias de polpa dentária de 1 indivíduo com SR e de 4 indivíduos saudáveis para compor o grupo controle. Foram realizados os ensaios de tempo de dobra populacional (Doubling Time, DT), de β-galactosidase e expressão do gene P21, tanto nas células SR quanto nos controles, antes e após a criopreservação. A linhagem pulpar SR demonstrou padrão de DT e senescência similar ao dos controles, não houve diferença significativa nesses ensaios entre os grupos de CPHs congeladas e frescas. Em relação à expressão do gene P21, não houve diferença estatística entre controles frescos e criopreservados. Assim, diferente do que foi descrito anteriormente, sugere-se que a cultura primária de células pulpares do paciente SR avaliado apresentou padrão de proliferação e senescência semelhante ao de pacientes saudáveis e a criopreservação a -80°C parece não alterar o padrão de proliferação e a taxa de senescência de CPHs. Tais diferenças entre estudos podem ser atribuídas à heterogeneidade inerente às culturas primárias e ao fato das culturas serem provenientes de dentes de pacientes com mutações diferentes e com grau de patologia pulpar distinto.