Purificação e caracterização de peptídeos antimicrobianos inéditos isolados da secreção cutânea da rã Leptodactylus labyrinthicus

Abstract

Atualmente, as doenças infecciosas estão entre as principais causas de mortalidade no mundo devido à resistência dos microrganismos aos antibióticos disponíveis no mercado. Os anfíbios dispõem de características especiais em relação a outros grupos de animais, por possuírem em sua pele glândulas responsáveis tanto pela respiração, regulação de temperatura e osmorregulação quanto pela liberação de compostos bioativos, com propriedades antimicrobianas, antifúngicas e antiparasitárias que servem para a proteção da integridade do animal. A secreção cutânea do anuro Leptodactylus labyrinthicus já foi analisada, resultando na descoberta de peptídeos antimicrobianos (PAMs) como a pentadactilina, a falaxina e a leptoglicina. Neste trabalho, a partir de ensaios de varredura das frações advindas de cromatografias por RP-HPLC, foram identificadas sete frações ativas para as bactérias patogênicas Escherichia coli e Staphylococcus aureus. Posteriormente, análises por espectrometria de massas do tipo MALDI-TOF possibilitaram a identificação dos PAMs previamente descritos para essa espécie, além de outros componentes que representam possíveis fragmentos dos PAMs já caracterizados, bem como peptídeos inéditos. Foram identificadas duas frações ativas: LLF5 e LLF-9. A partir da recromatografia da fração LLF-9 foi isolado e caracterizado um peptídeo inédito presente nessa secreção. Tal peptídeo, com massa molecular de 2.601,42 Da, foi submetido ao sequenciamente químico por degradação de Edman, resultando em uma sequência não-ambígua composta por 25 resíduos de aminoácidos e tendo uma provável amidação na porção C-terminal: GLWDDLKAAAKKVVSSLASAAMEKL25-NH2. Esse novo PAM exibiu 96% de identidade com o peptídeo promotor de comportamento agressivo em machos (aggression-stimulating peptide, LASP) isolado da secreção cutânea da rã L. fallax. Estudos comportamentais devem ser conduzidos com o intuito de se determinar se o peptídeo de 2,6 kDa de L. labyrinthiucs também é capaz de promover comportamento agressivo nos machos dessa espécie.