Produção de proteases por fungos endofíticos isolados de plantas do cerrado

Abstract

As proteases são produzidas por quase todos os organismos vivos e são responsáveis por catalisar a hidrolise das ligações peptídicas de proteínas em aminoácidos e peptídeos. Nas indústrias, as proteases são utilizadas para a produção de alimentos, insumos farmacêuticos, detergentes, alimentos para animais, produtos químicos e fotografia. Estudos feitos em plantas medicinais de biomas tropicais indicam que fungos endofiticos que habitam os tecidos dessas plantas produzem uma grande variedade de produtos biologicamente ativos. Os fungos endofíticos são definidos então como microrganismos que habitam os tecidos internos das plantas de forma simbiótica, ou seja, sem causar nenhum mal aparente. Nos últimos anos, os fungos endofíticos revelaram-se como uma fonte de grande potencial para a produção de metabolitos secundários com promissoras aplicações na agricultura, no ambiente, na indústria farmacêutica e na indústria de alimentos. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial biotecnológico de fungos endofíticos isolados de plantas nativas do Cerrado, frente à produção de proteases de interesse industrial e farmacêutico e avaliar diferentes condições de manutenção e preservação dos fungos endofíticos. Foram reativados 21 fungos endofíticos em placas de Petri com meio de cultura batata-dextrose-ágar. O fungo endofítico OH 03, isolado da planta Ourátea hexasperma, se mostrou bastante estável, capaz de produzir proteases na presença de diferentes fontes de carbono e nitrogênio, temperatura e pH. Dessa forma, foi realizado um planejamento estatístico experimental Plackett–Burman Design com triplicata no ponto central para avaliar a interação de 5 variáveis independentes na produção enzimática para o fungo OH 03. As variáveis escolhidas foram: extrato de levedura, peptona, (NH4)2SO4, temperatura e pH. As variáveis (NH4)2SO4 e temperatura foram significativas com efeito negativo e positivo, respectivamente. O fungo OH 03 obteve sua melhor atividade no planejamento PBD com valor igual a 26,13 UI/mL. Além disso, os fungos endofíticos foram armazenados em três temperaturas 8 °C, -20 °C e -80 °C, reativados de três em três meses e avaliados quanto ao seu crescimento. A preservação de microrganismos na temperatura de -80 °C na presença de um agente crioprotetor foi a mais viável, mantendo 86% dos fungos endofíticos armazenados vivos durante 12 meses.