Comparação morfológica e funcional de neutrófilos equinos e humanos

Abstract

Os neutrófilos são as primeiras células recrutadas a partir da corrente sanguínea ao local da infecção ou dano tecidual, durante o processo inflamatório. Após a ativação por bactérias ou outros mediadores pró-inflamatórios como LPS e TNF, os neutrófilos executam várias funções como quimiotaxia, fagocitose, produção e liberação de ROS, enzimas proteolíticas e proteínas contidas nos grânulos. O LPS é uma molécula produzida por bactérias Gram-negativas, que estimula a produção de citocinas, geração de ROS, expressão de β-integrinas e L-selectinas, realização de fagocitose e inibição da apoptose, ao passo que o TNF é uma citocina pró-inflamatória, que aumenta a adesão do leucócito no endotélio e estimula a secreção de quimiocinas e induz a ativação do neutrófilo para a liberação de ROS e enzimas proteolíticas. Embora grande parte dos estudos utilize o EDTA para a coleta de sangue equino e o uso de heparina ser mais frequente para coleta de sangue humano, a influência do anticoagulante utilizado na coleta sobre os resultados dos testes realizados com neutrófilos equinos e humanos é pouco estudada. O presente trabalho propõe a comparação do uso de heparina e EDTA para a obtenção de neutrófilos de humanos e de equinos quanto ao rendimento, viabilidade, morfologia e resposta ao LPS e TNF. Os neutrófilos foram separados com Percoll, quantificados em câmara de Neubauer, avaliados quanto à capacidade fagocitária por microscopia e capacidade oxidativa pelo teste Nitroazul de tetrazólio (NBT) após ativação com LPS e TNF. A viabilidade não foi afetada pelo anticoagulante utilizado em nenhuma comparação. O EDTA aparentemente afetou a morfologia de neutrófilos equinos e aumentou o rendimento celular equino em relação à heparina (p<0,05). A produção de ROS em neutrófilos humanos não foi afetada pelo anticoagulante, mas em equinos, o EDTA aumentou o burst oxidativo provocado pelos ativadores LPS e TNF. A quantidade de células fagocitando no controle e no ativado foi maior mediante utilização de heparina (p<0,01), ocorrendo o mesmo na quantidade de leveduras fagocitadas por cada neutrófilo (p<0,05). Em síntese, esse trabalho demonstra que há vantagem no uso de EDTA para ativação e na quantidade obtida de neutrófilos equinos. E que neutrófilos equinos coletados com heparina apresentam maior capacidade fagocitária.