Otimização da PCR para detecção de Xanthomonas campestris pv. viticola em videiras assintomáticas

Abstract

O cancro bacteriano da videira, causado por Xanthomonas campestris pv. viticola Nayudu (Dye), foi detectado no Brasil pela primeira vez em 1998, no município de Petrolina, Pernambuco. Posteriormente, casos da doença foram relatados na Bahia, Piauí, Ceará, Goiás e Roraima. O cancro da videira representa a doença bacteriana mais importante da região do Vale do Submédio São Francisco, apresentando incidência expressiva e grande importância econômica. Considerando a crescente preocupação com o uso de material propagativo livre da doença, a possibilidade de sua disseminação para outras regiões produtoras e a necessidade de comprovação da sanidade de mudas, este trabalho teve como objetivo a detecção de X.c. pv. viticola em frutos e cachos assintomáticos, de forma a otimizar a detecção molecular do patógeno, e de determinar o limite mínimo de detecção da bactéria por PCR (Reação da Polimerase em Cadeia) e Bio-PCR aliado ao uso de meio semi-seletivo NYDAM. Nos ensaios realizados para detecção de X.c. pv. viticola foram utilizados cachos de videira inoculados artificialmente com suspensões de diferentes concentrações da bactéria. Os cachos inoculados foram lavados e foi realizada a PCR direta após centrifugação de alíquotas do lavado. Para a Bio-PCR, foi utilizada uma etapa de enriquecimento da população bacteriana presente nos frutos em meio NYDAM. Os ensaios demonstraram que é possível detectar X.c. pv. viticola a partir de frutos assintomáticos que possuem uma baixa concentração de células da bactéria aderidas a sua superfície (~103 ufc/ml), por meio da Nested-PCR realizada direto do lavado destes frutos ou através da Bio-PCR. Os resultados indicaram que o tempo de enriquecimento influenciou diretamente na sensibilidade do método de detecção, assim como a diluição do lavado das placas.