Similaridade genética entre acessos de Mentha utilizando marcadores ISSR e RAPD

Abstract

Utilizada nas indústrias farmacêutica, alimentícia e de cosméticos as espécies do gênero Mentha são cultivadas em várias regiões do Brasil, havendo um grande interesse econômico na produção de óleo essencial para o mercado interno e externo. A Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia possui um Banco Ativo de Germoplasma de menta, porém o conhecimento e uso deste germoplasma é ainda incipiente e demanda esforço imediato para que possa ser eficientemente explorado, preservado e continuamente utilizado. Além disso, há um desafio quanto à classificação da Mentha, devido à alta incidência de hibridação interespecífica entre as espécies. Uma das alternativas para incrementar o conhecimento da variabilidade genética e melhor utilização da coleção de menta, é a análise dos acessos por meio de marcadores moleculares do tipo ISSR (Inter Simple Sequence repeats) e RAPD (Random Amplified Polimorfism DNA) que são dominantes, de alta reprodutibilidade e apresentam altos níveis de fragmentos polimórficos. O advento das técnicas moleculares permitiu a análise da variação dos organismos ao nível de DNA, observando diferenças nas sequências gênicas com uso de marcadores moleculares. Este estudo teve como objetivo avaliar a variabilidade genética interespecífica dos 82 acessos de menta do banco utilizando marcadores moleculares ISSR e RAPD. Utilizou-se 12 iniciadores polimórficos de ISSR e nove de RAPD na amplificação do DNA por meio de reações de PCR, e a separação dos fragmentos foi realizada por meio de eletroforese em gel de agarose, corado com brometo de etídio. A matriz obtida pela análise dos marcadores foi submetida a análises estatísticas, com uso do software NTSYS (versão 2.21m) utilizando o coeficiente de DICE para a similaridade entre os acessos, e para análise de agrupamento o método UPGMA. Foram obtidos 182 marcadores para os diferentes genótipos, resultando em um dendrograma onde se pode observar a formação de dois principais grupos, com similaridade de 0.49 entre eles. O primeiro grupo dividiu-se em dois subgrupos com similaridade de 0.55. O primeiro subgrupo que constitui de 77 acessos, uma parte representou maior similaridade entre as espécies M. suaveolens Ehrh, M. spicata L., híbridos interespecíficos e diferentes espécies nomeadas Mentha sp, e outra parte pelas espécies M. piperita L., M. arvensis e M. longifolia Huds. O segundo subgrupo é representado principalmente pela M. canadensis L. O segundo grupo é formado apenas por um acesso de Mentha sp. Pode- se observar que o maior grau de similaridade ocorreu em dois acessos do híbrido Mentha spicata x suaveolens, com similaridade de 0.91. Dentre os acessos analisados 12 nomeados como Mentha sp agruparam-se junto a espécies conhecidas podendo sugerir a classificação dos mesmos. Conclui-se que o marcador utilizado pode ser útil para o melhor conhecimento dos acessos da coleção em conjunto com análises químicas e morfológicas, facilitando e possibilitando o desenvolvimento de outras pesquisas a respeito deste gênero. Os 21 iniciador usados foram eficientes para diferenciar os acessos de Mentha.