Vesículas de exocitose de Trypanosoma Cruzi como carreadoras de kDNA

Abstract

A patogênese da doença de Chagas está relacionada a reações autoimunes que podem ser desencadeadas pela transferência de kDNA do Trypanosoma cruzi para o genoma hospedeiro. As vesículas de exocitose são importantes na transferência de informações entre células que não possuem contato direto e, sabendo disso, foram isoladas por meio de placas Transwell para avaliar se aumentam a infectividade do T. cruzi e se transportam minicírculos de kDNA. Outro objetivo foi verificar se o tratamento das culturas com zidovudina, colchicina ou benzonidazol previne a liberação das vesículas e, consequentemente, a integração do kDNA. Para isso, as vesículas foram cultivadas com macrófagos da linhagem J774.A1. Macrófagos com ou sem contato prévio com as vesículas foram infectados com 106 parasitos e a taxa de infectividade das culturas foi determinada por qPCR. A incubação prévia da cultura com as vesículas promoveu aumento da infectividade das mesmas. Foram realizadas PCRs de nDNA e kDNA para eliminar a passagem do T. cruzi pela Transwell e para determinar a presença dos minicírculos de kDNA do T. cruzi no interior das vesículas, respectivamente. Foram visualizadas bandas de kDNA em todos os poços que continham vesículas de T. cruzi. Por outro lado, a análise por PCR demonstrou ausência de bandas específicas de kDNA do parasito com o uso das drogas. Como atualmente o tratamento é insatisfatório, a compreensão do papel das vesículas secretadas pelo T. cruzi na patogênese da doença de Chagas é de extrema importância para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas.