Caracterização do mutante do gene OPI3 de Cryptococcus neoformans

Abstract

Cryptococcus neoformans é uma levedura encapsulada da classe basidiomiceto com distribuição mundial, considerado um patógeno intracelular facultativo provido de uma estratégia patogênica diferenciada. Esta levedura possui a característica distintiva entre outros fungos patogênicos humanos de ter uma cápsula de polissacarídeo, que é essencial para a sua virulência. Outros fatores de virulência incluem a produção de melanina pela enzima lacase, a produção de urease e fosfolipases, a habilidade de crescimento a 37ºC e do parasitismo de macrófagos. Sabe-se que o fenômeno de QS, um mecanismo de comunicação microbiana em resposta a densidade populacional, pode interferir na expressão de fatores de virulência em bactérias e fungos patogênicos. Resultados preliminares sugerem que o gene OPI3 estaria envolvido em um fenótipo de baixa resposta à atividade de QS do tipo selvagem em C. neoformans. O objetivo do presente trabalho foi caracterizar fenotipicamente o mutante OPI3 a fim de começarmos a estabelecer o seu possível papel no QS e na regulação da expressão de fatores de virulência em C. neoformans. Para a avaliação da função gênica de OPI3 por meio da deleção gênica no modelo C. neoformans foram preparados mutantes através da deleção do gene OPI3 e inserção do gene de resistência à higromicina utilizando o método de PCR Dupla-Junta e transformação biobalística. Realizaram-se vários testes para caracterização fenotípica desse mutante, que incluem testes de crescimento em meios estressores, em meios para a produção de melanina, fosfolipase, crescimento em meio condicionado e teste de curva de crescimento. Nesse trabalho é apresentada uma caracterização preliminar desse mutante em comparação com uma linhagem selvagem desse fungo e abre portas para a sua melhor caracterização e para o estabelecimento da sua função no quórum sensing de C. neoformans.