Estratégias de transformação genética de tomateiro via agrobacterium tumefaciens

Abstract

Visando à transformação genética da cultivar de tomate industrial IPA 6 por Agrobacterium tumefaciens, várias estratégias foram abordadas neste trabalho. Dois explantes foram utilizados, hipocótilo e cotilédones, e foram submetidos a diferentes tratamentos para intensificar a taxa de transformação genética. Foi testado o uso de sonicação e infiltração, assim como os parâmetros de tempo e intensidade desses tratamentos durante a cocultura líquida. O período da cocultura sólida também foi um parâmetro avaliado. O uso do herbicida glifosinato de amônio como agente seletivo foi testado em substituição ao amplamente utilizado antibiótico canamicina. Todos os tratamentos testados foram avaliados de forma indireta e qualitativa pela expressão do gene repórter gus, através de ensaios histoquímicos. Os parâmetros de transformação genética que apresentaram maior expressão do gene gus quando os explantes foram submetidos à pressão de seleção do herbicida glifosinato de amônio foram definidos; o que torna este trabalho um ponto de partida para os próximos ensaios de transformação genética da cultivar de tomate industrial IPA 6 com o cassete de RNAi que contém sequências das regiões mais conservadas dos principais vírus que atacam o tomateiro em forma de grampo, para conferir resistência a esses vírus. __________________________________________________________________________ ABSTRACT

Aiming genetic transformation of industrial tomato cultivar IPA 6 via Agrobacterium tumefaciens, several strategies have been addressed in this work. Two explants were used, hypocotyl and cotyledons, and were subjected to different treatments to enhance the genetic transformation rate. The use of sonication and infiltration during liquid co-culture, as well as the parameters of time and intensity of these treatments were tested. The use of ammonium glufosinate as selective agent was also addressed instead of antibiotics. All treatments to increase genetic transformation were evaluated for expression of the gus reporter gene by histochemical tests. The genetic transformation parameters were set and showed the highest expression of the gus gene under the ammonium glufosinate herbicide selection pressure. This work is a starting point for obtaining genetic modified tomato cultivar IPA Industrial 6 resistant to viroses by RNAi strategy.