| Resumo: | O amendoim (Arachis hypogaea) é uma das leguminosas mais cultivadas no mundo devido ao seu alto valor energético. No entanto, a maioria das espécies domesticadas é suscetível a estresses bióticos e abióticos, resultando em perdas de produção. Em contrapartida, as espécies silvestres são fontes de genes relacionados à resistência a doenças e a adaptação a diferentes ambientes, que são características desejáveis e de importância econômica. Em particular, a espécie silvestre Arachisduranensis (acesso K7988) tem uma elevada capacidade de adaptação às condições de déficit hídrico. Visando a identificação de genes-candidatos associados à resposta ao déficit hídrico, folhas e raízes foram coletadas em sete pontos diferentes durante a indução do estresse: cinco pontos correspondentes a alterações no padrão de transpiração das plantas (NTR), e os outros dois, após 30 minutos e 72 horas de hidratação. O RNA total foi extraído e agrupado, para cada tratamento, utilizando- se quantidades iguais de RNA total de cada indivíduo de acordo com os pontos de coleta e tecido. Duas bibliotecas de cDNA de amostras estressada e controle foram construídas a partir de RNA total purificado e sequenciadas por pirosequenciamento, tecnologia em larga escala 454 (GS-FLX Titanium Kits Fragmento Series, Roche Applied Science), resultando em 380.601 genes transcritos (tamanho médio de 390pb) e 21.714 unigenes, dos quais 12.792 eram constituídos por contigs. Sete dos genes–candidatos mais representativos relacionados à resposta ao déficit hídrico foram selecionados para a validação por meio de RT-qPCR. Alguns desses genes mostraram uma regulação significamente positiva ou negativa ao longo do estresse e após a reidratação. Toda a informação gerada será importante para a caracterização de genes silvestres, descoberta de genes e desenvolvimento de marcadores moleculares. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT
The peanut, Arachis hypogaea is one of the most widely grown grain legumes in the world due to its high energy value. However, most of domesticated species are susceptible to biotic and abiotic stresses, resulting in production losses. Unlike, wild species are sources of genes related to disease resistance and adaptation to different environments, which are desirable traits of economic importance. In particular, the wild species A. duranensis (access K7988) has a high adaptability to water stress conditions. The aim of this study was to identify gene expression regulation in A.duranensis plants subjected to gradual water stress and its control irrigated plants. Leaves and roots were collected at seven different points of stress, when changes were observed in the pattern of plant transpiration, and after 30 minutes and 72 hours of rehydration. Total RNA was extracted and a pool was formed for each treatment, using equal amounts of total RNA from individuals in each collection point and for each tissue. Two cDNA libraries were constructed from total RNA purified from these pools and sequenced by pyrosequencing large scale technology 454 (GS-FLX Titanium Fragment Series Kits, Roche Applied Science), resulting in 380,601 expressed genes(average size of 390pb), which generated 21,714 unigenes, which consisted of 12,792 contigs. Seven of the most differentially expressed candidate genes related to hydricstress or abiotic stress were selected for validation through RT-qPCR. Some of these genes showed a significantly positive or negative regulation during stress and after rehydration. All information generated here will be important for the characterization of new wild genes, gene discovery and development of molecular markers. |
