Resposta das células de osteossarcoma humano Saos - 2 ao extrato da folha de Morus nigra

Abstract

O osteossarcoma é um tumor ósseo maligno primário que afeta principalmente crianças, adolescentes e adultos jovens com ocorrência de mutações na proteína p53. A pesquisa por novos agentes anticâncer de fontes naturais tem obtido sucesso em todo o mundo; trabalhos recentes demostram que os flavonoides têm o efeito anticancerígeno e atividade antiploriferativa. As plantas pertencentes ao gênero Morus apresentam grande quantidade de flavonoides, sendo amplamente utilizadas todas as partes da planta na medicina popular. Este estudo tem por objetivo avaliar o efeito do extrato da folha de Morus nigra, na expressão dos genes relacionados à apoptose BCL2 e BAX em células de osteossarcoma humano (Saos-2). As células foram expostas ao extrato de M. nigra diluído em metanol a 1% em concentrações variadas para o teste de viabilidade realizado com azul de tripan, durante um e cinco dias. Após cultivo de um dia na presença do extrato nas concentrações de 25 μg/mL, 100 μg/mL, 30 μL de metanol a 1% e não expostas a nenhum extrato constituíram o grupo controle. As células foram coletadas e a extração de RNA total foi realizada segundo o protocolo do Trizol Plus. O RNA obtido foi submetido a síntese de cDNA e o PCR real time com os primers dos genes BAX e BCL2. O teste de viabilidade demostrou citotoxicidade no grupo de 300 μg/mL e uma viabilidade celular de 70% no grupo de 100 μg/mL em um dia de exposição. No cultivo de 5 dias, houve citotoxicidade nos grupos do extrato de 100 μg/mL e 300 μg/mL e uma viabilidade de aproximadamente 60% no grupo 50 μg/mL. A expressão gênica de BAX apresentou diferença estatística significativa no grupo tratado com 25 μg/mL do extrato de M. nigra em relação aos outros grupos, com superexpressão desse gene. O grupo tratado com 100 μg/mL do extrato de M. nigra apresentou superexpressão de BCL2 em relação aos outros grupos. O aumento da expressão de BAX e BCL2 demostra que o extrato de M. nigra é capaz de ativas as vias de apoptose. A citotoxicidade deu-se de forma dose e tempo dependentes.