Uso de painel de genes para sequenciamento de próxima geração no diagnóstico molecular de osteogênese imperfeita

Abstract

A osteogênese imperfeita (OI) é um grupo de condições genéticas heterogêneas e caracterizadas principalmente pela fragilidade óssea. A OI é considerada um transtorno relacionado à síntese e estrutura do colágeno e a maioria dos casos (80-90%) está relacionada a mutações dominantes no COL1A1 e COL1A2, genes que codificam as cadeias de colágeno tipo 1 (COL1). Na última década, foram relatadas mutações em pelo menos 16 outros genes associados a casos de OI autossômico recessivo e um ligado ao cromossomo X. Clinicamente, a OI é caracterizada por apresentar alterações esqueléticas e extra-esqueléticas. A dentinogênese imperfeita (DGI), uma alteração na formação da dentina dentinária, está presente em aproximadamente 50% dos casos de OI dos tipos I a IV. O objetivo desse estudo foi identificar, pelo método de sequenciamento de nova geração (NGS), mutações patológicas em 33 pacientes diagnosticados com OI e caracterizar as alterações dentárias clínicas e radiográficas dos pacientes diagnosticados com DGI, em tratamento com bisfosfonato e em atendimento na Clínica de Pacientes Portadores de Anomalias de Desenvolvimento Dentário do Hospital Universitário de Brasília. Com a finalidade de caracterizar as manifestações dentárias, os prontuários desses pacientes foram analisados. A avaliação genética foi realizada por meio do desenvolvimento de um painel de NGS, composto de 14 genes associados à OI e a sua análise foi realizada utilizando a plataforma Ion AmpliSeq™. Por meio do NGS foi possível identificar 22 mutações patológicas em 33 pacientes diagnosticados com OI, apresentando ou não DGI. Um total de 18 mutações em heterozigose nos genes COL1A1 e COL1A2 foram identificadas neste estudo, sendo 9 mutações em COL1A1 previamente relatadas na literatura (7 missense, 1 nonsense e 1 frameshift), e 9 mutações missense em COL1A2 (6 já descrita anteriormente na literatura e 4 não relatadas, mas consideradas patogênicas de acordo com as análises in silico). Em quatro pacientes com história de consanguinidade foram identificadas mutações missense homozigóticas nos genes SERPINF1, P3H1 e CRTAP. Não foram encontradas mutações patogênicas nos genes estudados em 11 pacientes. Dos pacientes estudados, 21 apresentaram DGI. Alterações nos genes COL1A1 e COLA1A2 foram as mais frequentes, concordando com a literatura. Sete mutações não foram previamente relatas na literatura sugerindo serem mutações novas. A caracterização clínica revelou que todos os pacientes com DGI foram do tipo moderada. O estudo permitiu aos participantes um diagnóstico molecular através da técnica de NGS, podendo proporcionar para esses pacientes um aconselhamento genético adequado assim como um acompanhamento terapêutico mais preciso.